Susu kedelai memiliki peptida bioaktif yang berpotensi sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan kondisi optimum hidrolisis susu kedelai menggunakan enzim papain, memperoleh peptida bioaktif antioksidan dari hidrolisat protein susu kedelai, dan menentukan bobot molekulnya. Ekstraksi protein dilakukan dengan metode titik isoelektrik dan uji kadar protein terlarut dengan metode Lowry. Hidrolisis protein susu kedelai menggunakan konsentrasi papain 0,1; 0,2; dan 0,5 % (b/b) serta variasi waktu inkubasi 0, 2, 4, 8, 16, dan 24 jam pada suhu 37°C. Hasil hidrolisis dilakukan analisis proksimat, derajat hidrolisis, aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl) dan analisis bobot molekul peptida bioaktif dengan LC-MS/MS QTOF (Liquid Chromatography – Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry Quadrupole-Time of Flight). Hidrolisat protein dengan aktivitas antioksidan tertinggi difraksinasi menggunakan ultramembran filtrasi (MWCO ≤ 3 kDa). Hasil analisa proksimat susu kedelai menunjukkan kadar air, kadar abu dan kadar protein sebesar 92,950%; 0,247%; dan 5,654%. Hidrolisat protein dengan aktivitas antioksidan tertinggi ditunjukkan oleh konsentrasi enzim 0,2% pada waktu hidrolisis 8 jam dengan kadar protein terlarut 402,444 ppm, nilai derajat hidrolisis 11,000%, dan nilai IC50 52,344 ppm. Karakteristik fragmen protein diperoleh beberapa peptida bioaktif dengan kisaran bobot molekul 0,322 kDa – 26,138 kDa. Hidrolisat protein susu kedelai memiliki peptida bioktif yang diduga mengandung gugus aromatik yang berkontribusi terhadap aktivitas antioksidan.
Kata Kunci : Antioksidan;Enzim papain;Peptida bioaktif;Susu kedelai