Buah pepaya ‘Bangkok’ dan ‘California’ banyak dikonsumsi oleh masyarakat, sehingga biji pepaya berlimpah dan belum dimanfaatkan dengan baik. Biji pepaya memiliki senyawa metabolit sekunder sebagai antibakteri. Tujuan penelitian ini adalah untuk menguji aktivitas antibakteri dan mengetahui kandungan ekstrak biji pepaya (Carica papaya) dari varietas ‘Bangkok’ dan ‘California’ dalam menghambat pertumbuhan bakteri uji. Simplisia biji pepaya diekstrak menggunakan metode maserasi. Pengujian antibakteri menggunakan metode difusi cakram Kirby Bauer, selanjutnya dilakukan uji lanjut yaitu MIC (Minimum Inhibitory Concentration). Hasil diameter zona hambat dari ekstrak biji pepaya ‘Bangkok’ terhadap bakteri Escherichia coli, Salmonella sp., dan Staphylococcus aureus pada konsentrasi 20% berturut-turut, yaitu: 6,64; 6,7; 6,81 mm. Nilai diameter zona hambat pada ekstrak biji pepaya ‘California’ berturut-turut, yaitu: 6,76; 7,82; 6,69 mm. Nilai MIC pada konsentrasi 20% ekstrak biji pepaya ‘Bangkok’ terdapat pada bakteri E. coli, sedangkan ekstrak biji pepaya ‘California’ terdapat pada bakteri Salmonella sp. Ekstrak etanol biji pepaya ‘Bangkok’ memiliki 20 senyawa, sedangkan biji pepaya ‘California’ memiliki 24 senyawa. Ekstrak biji pepaya ‘Bangkok’ dan ‘California’ memiliki senyawa yang berbeda, sehingga pada uji antibakteri menghasilkan zona hambat yang berbeda. Ekstrak biji pepaya ‘Bangkok’ lebih efektif terhadap bakteri S. aureus, sedangkan ekstrak biji pepaya ‘California’ lebih efektif terhadap Salmonella sp.
Kata kunci: Antibakteri; Maserasi; Metabolit sekunder; Simplisia