Globba atrosanguinea Teijsm. & Binn. merupakan tumbuhan suku Zingiberaceae yang dikenal sebagai etnomedisin suku Dayak dan memiliki potensi ornamen yang tinggi karena perbungaannya yang indah. Habitat alami G. atrosanguinea di Kalimantan menjadi terancam disebabkan oleh degradasi Daerah Aliran Sungai (DAS). Karakterisasi morfologi G. atrosanguinea dari Kalimantan penting dilakukan karena menunjukkan adanya variasi. Karakterisasi molekuler dengan barkoding DNA menggunakan region Internal Transcribed Spacer (ITS) dari genom inti juga dilakukan untuk melihat kekerabatan antar aksesi. Sebanyak 33 spesimen herbarium G. atrosanguinea aksesi Kalimantan yang tersimpan di Herbarium Bogoriense (BO) diobservasi untuk dilakukan karakterisasi morfologi. Namun, hanya dipilih 4 sampel untuk pengerjaan barkoding DNA dikarenakan keterbatasan sampel material DNA. Sebanyak 18 sekuens ITS G. atrosanguinea dan spesies lain yang berkerabat dekat ditambahkan dari NCBI GenBank untuk analisis filogenetik. Analisis filogenetik menggunakan metode Neighbor-Joining dengan model p-distance diimplementasikan dengan pairwise distance calculation dalam MEGA 7.026. Hasil karakterisasi morfologi menghasilkan 3 kelompok yang memiliki perbedaan bentuk helaian daun. Hasil karakterisasi molekuler menggunakan barkoding DNA region ITS dapat mengungkapkan hubungan filogenetik G. atrosanguinea dengan spesies lainnya, tetapi tidak dapat membedakan antar aksesi karena variasi nukleotida yang sangat rendah. Hasil persebaran G. atrosanguinea aksesi Kalimantan berdasarkan data spesimen di BO terdistribusi di setiap provinsi di Pulau Kalimantan.
Kata kunci: Barkoding DNA, Internal Transcribed Spacer (ITS), Globba atrosanguinea, Pohon Filogenetik