Daun johar (Cassia siamea Lamk) diketahui berpotensi sebagai tanaman obat. Ekstraksi daun johar
biasanya dilakukan menggunakan metode maserasi, namun ekstrak yang dihasilkan dengan metode ini harus mengalami perlakuan khusus dan membutuhkan waktu ekstraksi yang lebih lama. Penggunaan ekstraksi subkritik HFC-134a merupakan alternatif potensial untuk ekstraksi senyawa bahan alam. Penelitian ini bertujuan untuk mengekstraksi senyawa dari daun johar (Cassia siamea Lamk) menggunakan ekstraksi subkritik HFC-134a dengan perbandingan massa sampel:pelarut 1:10 selama 9 jam dengan 3 kali siklus. Proses ekstraksi menghasilkan ekstrak dengan rendemen sebesar 0,4698% dan proses fraksinasi menghasilkan 2 fraksi terpilih dengan bobot terbanyak dan wujud semi kristal padat. Kedua fraksi tersebut memiliki aktivitas antioksidan berdasarkan uji kuantitatif aktivitas antioksidan metode DPPH dan memberikan nilai % inhibisi sebesar 21% untuk fraksi 2 dan 29% untuk fraksi 7 masing-masing pada konsentrasi 200 ppm. Berdasarkan hasil karakterisasi menggunakan FTIR terdapat beberapa gugus fungsi umum seperti O-H, C-H alkana, C=O, C=C, C-O dan =C-H alkena. Sedangkan identifikasi dengan LC-MS/MS menghasilkan beberapa senyawa prediksi seperti δ-dekalakton, biotin, dan asam korismat pada fraksi 2 serta senyawa teobromin, arabsin, digoxigenin dan oksitetrasiklin pada fraksi 7.
Kata kunci: Antioksidan DPPH, daun johar, ekstraksi subkritik HFC-134a, dan LC-MS/MS