Jerami padi dapat dimanfaatkan sebagai sumber pakan, tetapi memiliki beberapa kelemahan, yaitu rendahnya kandungan nutrisi dan nilai cerna. Proses fermentasi dengan pemakaian urea dan starter isi rumen sapi diharapkan dapat meningkatkan kualitas pakan Jerami Padi Fermentasi (JPF). Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh konsentrasi (%) pemakaian urea dan isi rumen yang dapat meningkatkan kualitas JPF sebagai pakan ternak ruminansia secara in vitro. Metode yang digunakan adalah eksperimental menggunakan rancangan acak lengkap pola faktorial (2x3) dengan 4 kali ulangan yang dianalisis dengan Analysis of Variance (p=0,05). Faktor pertama adalah konsentrasi penambahan urea (1,5% dan 3,0%). Faktor kedua adalah konsentrasi penambahan isi rumen (0%, 0,75%, dan 1,5%). Parameter yang diamati terdiri dari nilai bahan kering, bahan organik, Neutral Detergent Fiber (NDF), acid detergent fiber, glukosa, NH3, pH, produksi gas, dan Total Volatile Fatty Acid (TVFA). Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan urea dan isi rumen dapat meningkatkan kualitas JPF. Penambahan urea secara signifikan dapat menurunkan nilai bahan kering, dan NDF serta dapat meningkatkan nilai bahan organik, lemak kasar, protein kasar, pH, produksi gas, dan TVFA. Penambahan isi rumen secara signifikan dapat meningkatkan nilai protein kasar, pH, NH3, produksi gas, dan TVFA. Penambahan urea 3,0% dan isi rumen 0,75% menunjukkan hasil terbaik dalam meningkatkan kualitas pakan JPF.
Kata Kunci: Fermentasi, In Vitro, Isi Rumen, Jerami Padi, Urea.